细胞论文多篇

细胞论文 篇一

1应用于微球内外径等尺度指标的自动测定

2应用于细胞检测

2．1背景

细胞是生物医学研究的重要对象之一，通过分析细胞的显微图像我们可以得到很多有用的信息。红细胞是人类血液中存在的主要细胞，一直是研究的热点。正常的红细胞呈双凹圆盘状，而衰老和不健康的红细胞会呈棘形、双凹消失等不规则的形态。通过观察与分析显微图像中红细胞的形态可以评价其健康程度。所以这里以红细胞为例说明如何采用VBAI编写适合于进行细胞图像分析的技术过程。

2．2方法

将红细胞悬浮于缓冲液中，置于显微镜下观察，利用数码CCD摄像头拍摄下细胞的图像。检测程序上需要先寻找到各个细胞，再对每个细胞进行检测，与微球检测的过程类似，程序总体设计上依然可以利用上节中微球的检测程序的设计，但需要根据有关图像处理分析的内容更改具体的图像处理分析操作。在图像预处理操作中需要将原始图像处理为适合物体识别的二值化图像，利用VisionAssistant，先对图像转灰度图像、适当的LUT处理，在分割处理上，由于细胞边缘处明暗对比较大，边缘锐利，因此选用基于移动窗口分割的算法可以较容易地找到边缘。通过实验比较证明，选用Backgroundcorrection分割，可综合局部和全局的灰度变化信息。分割移动窗口大小设置为边长接近细胞边缘宽度2倍的正方形最为合适。分割完成后再对二值图像进行一定的形态学变换操作，将边缘尽量变得闭合并填充孔洞。最后进行DetectObjects操。接着将对细胞形态进行分析。首先根据DetectObjects操作中所检测到的物体列表，对每个细胞进行检测区域的建立，即设置ＲOI。然后依然使用FindCircularEdge操作，在该操作中调整参数，使得检测线能较准确的发现边缘。该操作完成后，将输出一项名为Deviation的参数，该参数代表了细胞边缘与标准圆的标准偏差。同时该操作还可以得到细胞直径等相关的信息。将Deviation除以直径后可以得到细胞边缘与标准圆的相对标准偏差，由于健康红细胞的图像是近似圆形的，因此Deviation参数可以一定程度上反映红细胞的健康程度。将实验中拍摄到的采用不同保存格式、保存不同天数的红细胞图片归类，用VBAI程序进行分析，结果保存在csv文件中。为较健康的细胞，图像中细胞外轮廓近似圆形，Deviation/Ｒ=1．2‰;为发生了一定形变的细胞，Deviation/Ｒ=3．2‰为严重变形的棘形细胞，Deviation/Ｒ=7．3‰。随着细胞变形程度加重，细胞的相对标准偏差值也随之增加。通过软件分析的优势在于：可以客观而定量地给出每个细胞的变形程度；可以快速自动地分析大量的图片，得到大量的数据，并对数据进行后续的统计处理，具有统计学意义。除此之外，还可以获得细胞的大小信息，通过视野内细胞个数，得到细胞分布密度信息等。

3应用于图像的改善

3．1背景

某些生物医学样品的显微图像，由于各种原因，其清晰度与对比度都不能满意，对此，也可以运用VBAI的图像处理的方式对图像进行改善。下面介绍花粉孢子断层扫描图像中噪音及对比度不理想的断层图作改善的技术过程。

3．2方法

首先对整幅图像中的噪杂进行去除，通常改善的方法有空域滤波和频域滤波，两种方法都可通过VisionAssistant中的算法实现。其中空域滤波的算子较多，功能更加丰富。不仅提供了低通、高通等10多种算子、每种算子3×3，5×5，7×7三种尺寸，还可以由用户自定义算子以满足特殊需要。整幅图像改善完成后对左右对比度及清晰度不理想的花粉孢子断层图像进行增强，首先建立一覆盖中央花粉孢子像的区域，使用一可旋转的长方形区域，长方形的方向与左右像平移的方向垂直，宽度等于左右像平移的距离。接着利用Calculator操作计算图11(a)左右像的位置。输入中央像的中心点(X0，Y0)、角度α和平移距离L，则左像、右像中心点(X1，Y1)，(X2，Y2)分别为：X1=X0+LcosαY1=Y0－LsinαX2=X0－LcosαY2=Y0+Lsinα以此为中心点坐标参数，长宽与角度参数使用中央区域的长宽与角度，分别建立覆盖左右像的区域，使用VisionAssistant对左右区域内的图像进行对比度、明暗度的调整增强。得到处理后的图像，三个层面的图像的对比度基本相同。利用VBAI对图像进行处理与改善，不仅功能丰富，适用性强，且操作简单，易于掌握，程序建立完成后还可以快速的对其他同类图片进行处理，大大节省了时间。

4结语

使用VBAI创建图像分析处理程序，可对各种生物医学对象进行分析和检测，可对图像进行处理与改善，其优势在于：

(1)相比起人眼观测和手动测量，本方法能够提供客观和量化的数据，可快速对大量图像进行自动分析并保存检测结果。

(2)相比起通用化的测量分析软件，本方法针对性强，针对各种特定情况和需要制定适应的程序，准确性、有效性和实用性高。

(3)相比起使用VC等编程软件编写特定测量分析软件，本方法简单，有大量强大的模块化功能自由选用，程序开发周期短，工作量小，不需要专业编程技能，一般人易于掌握，且程序易于调整改进。综上所述，使用VBAI可简单快捷的针对不同生物医学图像建立相应检测处理程序，可快速自动地对大量图像进行分析，得到客观量化的数据。VBAI是实验室快速建立生物医学图像处理与分析检测程序的有力工具。

细胞论文 篇二

第一节

一、细胞膜的结构和功能（B）

板书

教学过程

（二）细胞膜的主要生理功能

1.物质出入细胞膜的几种方式：

（1）自由扩散：

特点：从高浓度一侧运输到低浓度一侧；不消耗能量。例如：O2、CO2、甘油、乙醇、苯等。

（2）主动运输：

①特点：从低浓度一侧运输到高浓度一侧；需要载体；需要消耗能量。

②意义：（略）

2.细胞膜的生理特点：选择透过性

（第二课时）

引言：上节课我们学习了细胞膜的结构，细胞膜的结构是与它的功能密切相关的，那么，细胞膜有哪些重要功能呢？

讲述：科学家经研究发现，细胞膜有多种生理功能。比如说，物质交换、细胞识别、分泌、排泄、免疫，等等。其中，与周围环境进行物质交换是细胞膜的重要生理功能。

活细胞不停地进行新陈代谢活动，就必须不断地与周围环境进行物质交换，而物质交换必须通过细胞的“门户”——细胞膜来完成。离子和小分子物质是通过自由扩散和主动运输等方式进入细胞的，而大分子和颗粒性物质主要是通过内吞作用进入细胞的。首先，我们学习一种比较简单的运输方式。

（教师展示事先制作好的自由扩散活动图板，对照活动图板作简要说明：图中黄色表示细胞膜，红色球状物表示某物质。红色球状物多的部分为膜外，少的部分为膜内。接着教师演示红色球状物不断由膜外通过膜进入到膜内的情况。）

提问：如果红色球状物的多少代表某种物质浓度大小的话，那么，这物质进入细胞是由浓度高的一侧向浓度低的一侧运输，还是由浓度低的一侧向浓度高的一侧运输？

（回答：略。）

讲述：对了，是从浓度高的一侧向浓度低的一侧运输，而且在运输过程中，不需要消耗细胞内新陈代谢所释放的能量。上边这种运输方式叫做自由扩散。自由扩散相对于主动运输来说，又叫做被动运输。符合这种方式运输的物质仅限于小分子物质。

另外，还有一些物质在进入细胞时，不同于自由扩散方式，例如：轮藻细胞中的K+浓度比它所生存的环境中K+多63倍，海带细胞中的I—比海水高出40倍，人的红细胞中的K+比血浆高30偌，而红细胞中的Na+浓度却是血浆中Na+的浓度的1/6。由此可见，以上细胞具有不断积累K+、I—的能力和运出Na+的能力，以致不使膜内外的Na+、K+、I—达到平衡。上述这些物质是怎样进行运输的呢？（教师展示事先制作好的主动运输活动图板，在做简要说明后演示物质由膜外进入到膜内的过程，同时启发学生进行观察和思考。）

提问：上述这种运输方式具有哪些特点？

（回答：略。）

讲述：当物质通过细胞膜由低浓度一侧向高浓度一侧移动时，就像物体沿斜坡上移一样，必须由外部提供能量，在对上述Na+、K+、I—等物质的运输中，所需要的能量是由细胞来供给的。通过上面的学习，我们可以总结出主动运输主要有以下两个特点：①是从浓度低的一侧运输到浓度高的一侧；②需要消耗细胞内新陈代谢所释放的能量。

提问：物质的主动运输方式在生物学上有什么意义呢？

（请同学们阅读课文并讨论，最后请一位同学回答，略。）

讲述：由物质通过细胞膜的两种运输方式可以看出，细胞膜可以让O2、CO2、水分子等小分子自由通过，细胞要选择吸收的离子或小分子也可以通过，而另一些离子，小分子和大分子则不能通过。这一现象说明细胞膜在生理功能上有什么特点呢？

回答：具有选择性

讲述：对，细胞膜是一种选择透过性膜。关于细胞的内吞作用和外排作用，请同学们阅读课本中小字部分。

小结：今天我们学习了细胞膜的生理功能，了解到细胞结构与它的生理作用是相统一的，尤其是物质出入细胞膜时具有选择透过性的特点，对于细胞完成正常生命活动具有十分重要的意义。下面，请同学们根据今天所学的内容，填写下表。

出入细胞物质举例

物质出入细胞的方式

细胞膜内外物质浓度高、低

是否需载体蛋白质

是否消耗细胞内的能量

甘油

进入红细胞的K+

细胞生物学论文 篇三

关键词： 细胞生物学 考试方法 改革策略

细胞生物学作为生物学相关专业的基础课程，其考核环节一直为我国高校相关专业所重视。传统细胞生物学课程的考试环节主要以闭卷检测作为考核方式，以考试分数作为标准对学生的学习能力及学习成绩进行评定。这种考核方法难以有效地反映学生的综合素质，因此对细胞生物学课程考试方法进行改革具有一定的必要性。

一、细胞生物学课程考试改革的原则与思路

（一）考试方法改革原则

由于细胞生物学课程专业性及理论性较强，对该课程考试的改革应以培养学生的自主创新能力及动手实践能力作为切入点，根据学生的实际专业需求及个人能力的差异性对学生能力进行评价[1]。对专业成绩的评述不应单纯地以闭卷理论试卷成绩为最终成绩，应当综合评价学生日常课堂表现、实验课表现及课堂讨论等环节表现出的能力，并对成绩比例进行合理分配，具体考试方案由各专业教研部门自行确定。通过引入综述论文、课堂发言、实验课表现等环节的成绩评定，可以有效提高学生的学习兴趣。

（二）考试方法改革思路

对细胞生物学课程考试方法的改革，主要将考试成绩合理地划分为“闭卷理论考试（60%）+论文综述（10%）+实验课表现（20%）+日常课堂表现（10%）”四个部分。

1.对学生日常课堂表现进行评价

学生的学习活动以课堂学习为主，因此对学生日常课堂表现进行客观评价可以有效地反映学生细胞生物学课程的知识水平及能力基础。因此，将细胞生物学课程考试成绩中的10%作为日常课堂表现的分值，主要对学生课堂参与程度、讨论问题积极性、师生互动与沟通、课堂出勤率等方面进行考察，从而有效地提高细胞生物学课程教学质量。

2.对学生实验课表现进行考核

细胞生物学课程主要由理论课及实践课构成，实践课教学可以有效地对理论进行验证，是学生深化理论、接触生物学领域的重要途径。传统细胞生物学课程的考试主要侧重期末闭卷考试的考试成绩，对实验课考核重视程度不足，导致绝大多数生物教师在教学过程中缺乏相应的重视。将细胞生物学课程考试成绩中的20%作为实验课表现的分值，可以有效地提升学生实验操作的积极性。

3.设计论文综述环节进行考评

为了提升细胞生物学课程的考评的合理性，可以设计相应的论文综述环节，对学生整体知识结构的掌握能力进行考核。论文综述环节可以在考试周前一周至两周进行，由教师提前布置相应的论文论述主题，给予学生充足的时间撰写论文、制作幻灯片，在考核过程中由学生自主上台进行论文汇报，再由其他学生进行自主提问。在评分过程中，可以将细胞生物学课程考试成绩中的10%作为论文综述环节的分值。

二、细胞生物学课程考试改革应注意的问题

（一）加强相关教师的素质培训

随着新课程改革的深化，虽然学生成为课堂教学活动的主体，但教师仍然处于主导者地位，教师的职业素质及教学观念直接影响细胞生物学课程考试方法改革的贯彻效果。因此，为了保证细胞生物学课程考试改革的有效性，我国高校相关专业应当开展周期性培训，培养生物教师相应的职业素养，相关专业教研室应根据教学活动的推进对教师进行跟踪性的培训，积极开展教学前期培训、教学中期检测及教学末期总结，保证生物教师可以明确细胞生物学考试方法改革的必要性，并从考试改革入手提高课堂教学质量。

（二）贯彻落实相应的考核操作

在明确了细胞生物学课程考试方法改革的原则与思路之后，应当将相应的方案与思路落实到实践中，用实践检验理想化的方案，提高细胞生物学课程考试方法改革的合理性[2]。在实际考核操作过程中，教师应当制定相应的规章制度明确相应的考核流程，并对学生课堂表现、课堂出勤情况等评价因素进行了解。在实际考核过程中，可以打破传统单一性由教师评价学生的教学模式，引入相应的学生互评、学生自评评价机制，尊重学生实际能力的差异性，对学生成绩进行合理的评估。

（三）在考核过程中加强教师的协作

由于细胞生物学课程考核具有较强的专业性及理论性，且考试改革涵盖面与考察面较为广泛，学生成绩考核工作难以由一个教师单独完成，因此应当以过程性目光看待细胞生物学课程考核工作，加强各环节教师的协作与沟通。在学生成绩评价过程中，由不同的教师负责学生日常表现统计、学生论文综述情况、学生试卷批阅等环节。在过程性评价中教师之间进行合理化分工，可以有效提升学生成绩考核的合理性。

（四）引导学生注重日常学习过程

细胞生物学课程考核不仅具有检测教学成果的功能，还具备评价功及引导功能[3]。传统侧重期末考试成绩的考核模式对教学成果的评价较单一，很容易导致学生陷入学习时仅注重考点的学习误区。对细胞生物学课程考试方法的改革对学生日常表现、实验课表现等方面进行综合考核，因此教师应当注重引导学生的日常学习课程，尽可能地消除功利性的学习目的。

总而言之，细胞生物学不仅是一门集理论性、创造性为一体的学科，而且是临床医学及生物学的学科基础。在教学考核过程中，相关教师应当明确考试的评价功能及引导功能，树立素质教育理念，利用多种形式的综合性考核内容对学生学习情况进行考评。

参考文献：

[1]窦晓兵，高佳，范春雷，胡林峰，钱颖，沃兴德。细胞生物学课程考试方法改革的研究与实践[J].经营管理者，2009，23：327.

[2]肖明珠，毛建文，李红枝。医学细胞生物学考试方法的改革与实践[J].中国现代教育装备，2010，15：172-173.

[3]杨丽，张君，谢菁，徐文静，王岩。医学细胞生物学考试方法改革的探讨与实践[J].教育教学论坛，2014，31：69-70.

此文系基金项目：2015年普通高校教学改革项目，编号：湘教通[2015]291号-554。

细胞生物学论文 篇四

关键词：生物工程；生产实习；实践教学

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2017）23-0114-02

一、引言

细胞生物学是生命科学中一门重要的分支学科。细胞生物学主要从细胞的不同结构层次以及细胞间的相互关系来研究细胞生命活动（生长、分裂、分化、遗传变异、运动和兴奋、传导、衰老和死亡）的基本规律。从生命结构层次来看，细胞生物学位于分子生物学和个体生物学之间，同它们相互衔接、相互渗透。因此，从这一意义上来说，细胞生物学是一门承上启下的学科，和分子生物学一起同是现代生命科学的基础，并广泛渗透到遗传学、发育生物学、生殖生物学、神经生物学和免疫生物学等学科的研究中，和农业、医学、生物高新技术发展有着密切的关系，是生命科学的重要支柱之一[1]。

目前，国内已有过百所高校开设了细胞生物学专业，细胞生物学专业的培养目标是“使学生既掌握本学科的发展简史和前沿领域，又掌握细胞生物学的基础知识、基本概念和基本理论，使学生受到基本科学思维训练，同时使学生学会学习，具有自我开拓可获得知识和利用信息的能力。要求学生牢固掌握细胞的基本结构和功能及各细胞器间的关系的基本知识，并且能够掌握和了解细胞生物学的热点课题的现状和未来的发展趋势，包括生命信息流和细胞信息网络的研究、信号传递与细胞识别、神经活动的细胞及分子基础、蛋白质的加工与分选、发育的分子机制及遗传控制、细胞增殖、调控与编程死亡等，使学生对认识细胞的生命活动具有强烈的追求和探索精神，善于从生命现象探求其内在规律，能够运用现有的细胞生物学知识去研究生命科学中与细胞生物学有关的课题。”[2]当前，许多高校开设的细胞生物课程，针对学生综合能力的培养还不够，同时，缺乏专业性与系统性。本文针对本校细胞生物学课程存在的问题，在学校教改项目的支持下，探索“授之以鱼，不如授之以渔”的优化细胞生物学教学体系，融知识传授与能力培养为一体的教学新模式。

二、细胞生物学教学内容的优化

《细胞生物学》的内容涵盖植物、动物、细菌等多种生物，并且与其他学科内容交叉渗透广泛，因此教学过程中，容易导致主线不清晰，层次紊乱，内容繁杂等问题。在教学过程中，要使学生在脑海中建立起一个较为牢固的细胞生物学的知识体系和网络，这就要求在一线教学的我们更多地考虑授课的内容。

（一）突出重点，避免重复

细胞生物学课程内容涉及到微生物学、生物化学、植物生理学、动物生理学、遗传学和普通生物学等学科，这些专业课的内容在授课的时间上不一致。为了有效避免与先行课程中所讲授的内容出现重复，并且游刃有余地突出本课程在此知识点上特有的重点，必须对教学的内容进行优化。首先在教学的过程中应该掌握每个章节的内容与哪门课程的知识点重复；其次应了解与此知识点重复的课程的授课时间是否早于此知识点。若是，则在教授此知识点时，与细胞生物学不相关的内容则一带而过。若否，则建议在传授此知识点时，即使此内容与细胞生物学的内容相关性不强，但为了方便学生更加深刻地理解此知识点，则应简单介绍。比如在介绍线粒体和叶绿体这两个章节的内容时，电子传递链、氧化磷酸化和光合磷酸化的内容在生物化学课程中是作为重点讲授的内容。因此，在细胞生物学课程中，若学生已经具备了此知识点，则在讲课的过程中，我们应当简单提及此知识点，而重点阐述线粒体与叶绿体的结构与化学组成、其上蛋白的定位、代谢自主程度，核基因对其控制及其起源等。又比如细胞核与染色体章节中，在分子生物学和遗传学的内容中，都重点阐述了此部分内容，因此在细胞生物学课程中，仅做简单介绍即可。这样，使本学科与其他课程的知识紧密衔接又避免了不必要的重复，在有限的学时内，将重点内容最大化地传授给学生。

（二）贯穿前沿内容，贴近时展

细胞生物学是一门实验科学，科学在日新月异地发展，而我们的课本却并不能时刻地更新以顺应科学的发展。因此，这就要求我们的细胞生物学的教师不能因循守旧，只顾及课本的基础知识点。我们必须站在科学发展的前沿，掌握本领域科技发展动态，并将此动态转化为知识点的内容，及时传递给学生，激发学生对科研的热情，吸引其注意力。近年来的诺贝尔医学或生理学奖绝大多数都颁给了细胞生物学相关的研究领域，例如今年的奖项颁发给了日本科学家大隅良典，赞扬其在细胞的自噬作用方面的卓越贡献。当我们在传授“溶酶体的自噬作用”这一内容时，我们可以将此例先呈现出来，吸引学生的注意力，再将要讲授的知识点加以阐述，以便于学生对知识点的理解和记忆更加牢固。

（三）启发引导，对知识点适当延伸

改变传统的“教师在讲台上照本宣科，学生在台下死记硬背应付考试。”的僵化做法。在传授学生知识时，我们教师应该多用“问题导入法”来引出知识点，并让学生根据他们现有的知识，在脑海中搜寻相关的解释。这一方面让学生积极参与课堂之中，最重要的是让学生学会思考问题，比如在讲授“细胞的大小及体积恒定”这一小节时，可以先让学生思考一个问题：人和小鼠相应的器官都是由细胞组成的，比如心、肺、脾脏等，但是人的这些器官都比小鼠大很多，那么这到底是由于细胞的数量造成的，还是由于细胞的大小不一造成的？另外，每个知识点发F过程的背后都是有很有趣的小故事，在传授这些知识点之前，我们教师不妨先讲述一下这些小故事，从而激发起学生发现新知识的热情和动力，帮助学生学会预测、预见和构想未来事物的发展变化，不断增强学生的自觉性和创造性。

三、教学手段和方法的优化

在慕课和微课逐渐发展壮大的大背景下，我们教师应该通过整合网络上优秀的资源来进行授课。虽热目前慕课和微课的资源并不能完全涵盖整个细胞生物学的所有知识点，但部分已经成型。在上课前，我们可以让学生通过自学的方式先对知识点进行预习，通过上课提问的方式来了解学生学习的动态，这样可以有效避免因为教师“填鸭式”的授课让学生出现学习上的“惰性”。在上课时，我们可以通过“自学―讨论―总结”的教学模式来激发学生对学习以及探索的热情。

四、改革考核方法

下，各个院校最常用的考核方式局限于期末考试，这样带来的不可避免的一个问题就是，就算学生平时不怎么学习，只要在期末前几天突击一下，也可以取得一个不错的成绩。为了提高学生的综合能力，我们应当改变考核方式。考核应贯穿于整个课程学习之中，如布置课程论文就是一个提高学生综合能力的方法。在部分知识点或者章节讲授完成之后，给出一个研讨题，让学生以团队的形式共同查阅相关的文献，最终以PPT或者以课程论文形式进行专题交流研讨，这样不仅提高了学生的论文查阅能力、团队协作能力、语言表达能力，还提高了学习的主动性，对科研训练和毕业设计也将起到很大的作用。

五、结语

专业课是指导学生认识所学专业，规划未来发展方向的向导。因此在专业课的学习过程中，积极有效地引导大学生对待问题、解决问题的方式，这对培养学生的创新能力，拓展学生的视野有积极的意义。通过不断研究与探索细胞生物学教学体系，我们对细胞生物学的教学内容、方法与手段、考核方法等有了一定的认识。在今后教学实践中，我们会继续改进，提升教学质量，提高学生综合素质。

参考文献：

[1]邹东方，王喜忠。细胞生物学“教师、教材、教法”三位一体课程建设与改革[J].中国大学教育，2011，（10）：52-54.

[2]范纯新，郭弘艺，唐文乔。细胞生物学教学存在的问题与改革思路[J].中国校外教育，2011，（6）：76-77.

Practice and Explorations in Optimizing Cell Biology Teaching System

WANG Juan，WEI Cun-xu，ZHANG Long

（College of Life Science and Technology，Yangzhou University，Yangzhou，Jiangsu 225009，China）

Abstract：Cell Biology is one of the four mainstays of life science and it is also the frontal paper discuss the reform of teaching content，teaching methods and means，evaluation system about Cell Biology so as to improve the teaching quality，enhance student's practical capabilities as well as their comprehensive and problem solving abilities.

细胞生物学论文 篇五

细胞凋亡采用FITC-PI双染色方法检测。制备转染后的GSCs细胞悬液，每管加入10μLFITC溶液，避光孵育30min后，每管加入10μLPI溶液，C6流氏细胞仪每管抽取10000个细胞进行分析。实验重复6次。细胞迁移及侵袭能力采用Transwell小室方法检测。制备转染后的GSCs细胞悬液，以每孔100μL含51×10细胞数接种于Transwell小室的上室，下室加入500μL高糖DMEM培养基（含10%胎牛血清），48h后取出小室，PBS清洗上室内的细胞，室温晾干后4%多聚甲醛固定30min，PBS清洗3遍，至于吉姆萨染色液中染色30min，取出室温晾干后，置于显微镜直接观察拍照，随机选取5个视野计数染色细胞个数。细胞侵袭能力检测需在Transwell小室的上室内预先铺置基质胶，置37℃、5%CO细胞培养箱中26h后备用，余步骤与细胞迁移实验相同。实验重复6次。统计分析用SPSS18.0统计软件对数据进行处理。实验数据用表示，两组间采用t检验，多组间采用单因素方差分析和Bonferroni检验，<0.05认为有统计学差异。

2结果

2.1U87来源的GSCs的鉴定

如图1A所示，U87细胞置于干细胞培养基培养后形成细胞球，此细胞球同时表达Nestin（神经干细胞标志物）及CD133（肿瘤干细胞标志物），在图1B中，细胞球在含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中进行分化培养2周后，细胞表达胶质细胞活化的典型标志物GFAP，以及神经元的典型标志物tubulinIII。以上结果说明在干细胞培养基形成的细胞球细胞为典型的胶质瘤干细胞，具有神经系统肿瘤干细胞的特征，并且具有多向分化能力。

2.2在GSCs中，miR-144呈现低表达状态

如图2所示，Real-timePCR结果显示，与non-GSCs相比，在GSCs中miR-144的表达明显降低（<0.01），说明miR-144可能参与了脑胶质瘤的发生和发展。

2.3转染后，miR-144的表达

如图3所示，在pre-miR-144组中，miR-144的表达显著提高（<0.01），而在anti-miR-144组中，miR-144的表达显著降低（<0.01）。

2.4过表达miR-144降低GSCs的细胞活力

如图4所示，在pre-miR-144组中，GSCs的细胞活力显著降低（<0.01），而在anti-miR-144组中，GSCs的细胞活力显著提高（<0.01），但是在pre-NC组和anti-NC组中，GSCs的细胞活力与对照组比较无统计学差异。

2.5过表达miR-144促进GSCs凋亡

如图5所示，在pre-miR-144组中，GSCs的细胞凋亡率显著增加至15.6%（<0.01），而在anti-miR-144组中，GSCs的细胞凋亡率显著下降到3.6%（<0.01）。但是在对照组，pre-NC组和anti-NC组中细胞凋亡率分别为8.1%，7.9%和7.9%，三组间无统计学差异。

2.6过表达miR-144抑制GSCs的细胞迁移及侵袭

如图6所示，在pre-miR-144组中，细胞的迁移能力显著降低（<0.01），而在anti-miR-144组中，细胞的迁移能力显著提高（<0.01）。但是在pre-NC组和anti-NC组中，细胞迁移能力与对照组比较无统计学差异。此外，在细胞的侵袭能力检测中，我们得到了相似的结果。

2.7MiR-144靶基因的预测

如图7所示，我们经过查阅生物信息学预测软件Targetscan、Pictar和RNAhybrid等，发现有众多基因存在miR-144的结合位点，经查阅文献得知其中X染色体连锁锌指转录因子（ZFX）和酪氨酸激酶受体（TEK）与GSCs的发生展有着密切的关系。

3讨论

在人体内，miRNAs含量巨大且种类繁多，其典型作用为降解靶基因mRNA或抑制其翻译，从而参与调控人体内的各种生命活动。近年来关于miRNAs的研究逐步增多，其主要的研究方向主要在于探寻miRNAs在各种生命活动中的作用，但许多研究显示miRNA在不同的组织及细胞中表达水平有着显著差[10]异。尤其是在普通细胞和干细胞中，由于干细胞具有的特殊能力导致其细胞内的诸多生命活动都有[2]别于普通细胞，因此关于miRNA在干细胞生命活动的机制研究显得尤为重要，并为揭示干细胞的特性及其产生机制提供了直接可靠的证据。脑胶质瘤是公认的神经系统的恶性顽疾，也是被研究最多的神经系统肿瘤，更是在所有肿瘤中较早成功分离鉴定出含有干细胞的肿瘤之一，关于脑胶质瘤干细胞的研究主要集中在其干细胞特性的研究，有研究显示CD133和Nestin等因子是维持脑胶质瘤干细胞干性的[11,12]必须因子，因此这两种因子也被认为是鉴定脑胶质瘤干细胞的特征因子。研究显示miR-101及miR-152等可通过抑制其下游靶基因的表达从而抑制脑胶[13,14]质瘤干细胞的恶性生物学行为，这些研究为脑胶质瘤的治疗指引了方向。但是由于miRNA的种类繁多及数量庞大，需要不断的研究来补充完善各方面的数据，以便为脑胶质瘤干细胞的研究提供更可靠全面的证据。故本研究着重探究miR-144在脑胶质瘤干细胞中的作用。进一步明确miR-144在脑胶质瘤干细胞中产生作用的可能机制，为脑胶质瘤的治疗提供新的方向及有效途径。在本研究中，我们成功分离鉴定了U87来源的GSCs，Real-timePCR实验结果显示与non-GSCs相比，miR-144在GSCs中呈现低表达状态，提示miR-144在脑胶质瘤的发生和发展中起重要作用。进一步的实验表明GSCs在转染miR-144mimics48h后，细胞活力显著降低，细胞凋亡率显著增加，细胞迁移及侵袭能力也同样呈现抑制状态。但是，在转染miR-144inhibitors后，我们通过上述实验观察到了相反的现象。以上结果有利的佐证了我们对miR-144在GSCs中起到了抑癌因子作用的推测，也为miR-144在GSCs中的抑制作用提供了可靠的证据。由于miRNAs的主要作用方式为降解靶基因mRNA或抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动，我们通过查阅生物信息学预测软件（Targetscan，Pictar，RNAhybrid），发现有许多基因含有miR-144的结合位点，意味着这些基因可被其降解，并同时产生某些生物学效应。在众多的靶基因中我们发现有几个基因参与调控了GSCs的恶性生物学行为，例如X染色体连锁锌指转录因子可以通过增加c-Myc的表达水平，增加DNA的复制及促进细胞的增殖，从而维持GSCs的干[15]细胞特性及促进其恶，又如酪氨酸激酶受体可与血管生成素1形成联合网络信号，介导GSCs与血管内皮细胞间的物质交换，并使俩者产生紧密的贴合，形成了脑胶质瘤发生发展的源头，并[16]为GSCs转移与侵蚀提供丰富的血液供给。以上只是我们发现的2个在GSCs中起到关键作用的miR-144的靶基因，但是细胞内的复杂联系是难以估量的，由此我们推断miR-144至少通过降解以上2个靶基因的表达，从而对GSCs的恶性生物学行为起到了抑制作用，但是是否还有其他的靶基因也参与其中，或是形成网络调节有待进一步的研究证实，本研究结果为脑胶质瘤的治疗提供新靶点。

细胞生物学论文 篇六

关键词：医学细胞生物学；教学模式；教学改革

医学细胞生物学是一门以细胞生物学和分子生物学为基础，探索研究人体细胞发生、发育、增殖、衰老、死亡以及细胞结构与功能的异常与人类疾病关系的学科［1］。医学细胞生物学是临床医学、检验医学、口腔医学、预防医学等医学专业的一重要基础课，同时也是生理学、病理学、免疫学、组织胚胎学、药理学等医学基础课程以及后续临床课程的基础［2］。学习医学细胞生物学的基本理论知识有助于医学专业学生从分子细胞层面理解人体生命活动规律和疾病发生发展进程，为专业课学习和后续的科研工作奠定坚实的理论基础［3］。医学细胞生物学是一门实验操作性极强的学科，实验教学是这门课程教学工作中的重要实践环节，在培养学生动手能力、实践探索能力和科学创新能力等方面具有重要作用［4-6］。传统的教学理念和教学方法已经不能满足新时代的需要，如何能在有限的时间内，让学生系统掌握医学细胞生物学的基础理论知识，并熟练掌握基本实验操作技术，是新形势下医学细胞生物学教学改革的一项重要内容［7-8］。本文结合郑州大学基础医学院的实际情况，对医学细胞生物学理论课及实验课教学中存在的问题及改革策略进行探讨并提出建议，以提高医学细胞生物学教学质量。

1提高医学细胞生物学理论课教学质量的建议

1．1理论课教学内容的改革

首先，针对不同专业，因材施教。临床医学、检验医学、法医学、临床药学、预防医学等专业均需要开设医学细胞生物学。任课教师应该结合教学大纲并根据教材内容，为不同专业的学生制定相应的教学计划和授课内容，按照学校的课程设置，多方面、多角度、多层次因材施教，提高医学细胞生物学的课堂教学效果。其次，注重基础理论，由浅入深。注重教学内容的基础性，构建并完善由细胞基本结构及其功能、细胞重大生命活动现象及本质等所组成的理论教学体系，加强学生对基本理论知识及基础实验技术的理解。授课教师应该以真核细胞的结构与功能为教学重点，使学生对细胞的主要结构及其功能等有系统、全面的了解和认识。然后，精炼教材内容，突出重点。医学细胞生物学课程的内容较多，但课时有限，所以，任课教师应精炼教材内容，有的放矢授课。该门课程的必修内容是认识人类自身生命活动的基础，也是认识疾病发生、发展的理论基础。授课教师在授课过程中要注意精练授课内容，突出重点章节，同时，课后需要对本节课的内容进行归纳总结。

1．2理论课教学方法的改革

首先，使用启发式教学。授课教师应该在课堂上开展启发式教学，实现教师与学生的课堂互动。启发式教学相比传统单纯由教师讲课的教学方式更具有优势，可以更加有效地激发学生的学习兴趣。启发式教学不但注重知识的传授，更注重能力培养，因此，启发式教学可提高学生的思维能力和创新能力。其次，使用多媒体教学。医学细胞生物学课程中有很多细胞结构图和分子机制图需要制作成动画，以使复杂抽象的内容变得直观有趣，调动学生的学习主动性，增强学生的学习兴趣。同时，任课教师可以充分利用网络资源，搜集医学细胞生物学的视频课件资料并运用到课堂教学中。这样既可以拓展学生的学术视野，又可以提高学生的综合素质。然后，使用案例式教学。案例教学是在事实案例基础上的一种开放式、互动式的新型教学方式。医学专业学生不仅要掌握细胞的结构、功能，还应该熟悉细胞的病理改变与疾病发生发展的关系。但是由于医学细胞生物学课程的理论性强、内容抽象，所以任课教师应该积极探索案例式教学，以激发学生的学习兴趣，提高医学细胞生物学的教学质量。

1．3理论课考试方式的改革建议

首先，优化考试内容。任课教师可以通过以下几点优化理论课程的考试内容：(1)建立和完善理论课程的考试题库，保证理论课程考试的有效性；(2)根据本院开设的临床医学、检验医学、预防医学等专业设置相对应的考试题目；(3)指导学生撰写综述性论文或科研标书，以培养医学专业学生良好的思维能力和创新意识。其次，优化考试形式。任课教师可以通过以下方法优化理论课程的考试方式：(1)构建综合丰富的考试方式。建立平时成绩和期末考试成绩相结合的考试体系；(2)增加创新能力考试的比重。任课教师让学生按照要求写出科研标书并进行打分；(3)增加平时表现考试的比重。平时表现考试主要是在课堂上对学生回答问题的情况予以评分并记录。然后，优化评价方案。任课教师可以通过调整期末闭卷考试及平时表现考试优化评价方案。理论课考试中的期末闭卷考试成绩占理论课总成绩的70%，试题从考试题库中随机抽取。同时理论课考试中也包含学生的平时成绩，这一部分占总成绩的30%，包括学生的出勤情况、课堂上回答问题的情况以及学生完成综述性论文的情况。

2提高医学细胞生物学实验课教学质量的建议

2．1实验课教学内容的改革建议

首先，优化实验教学大纲。由于受到课堂学时及硬件条件等方面的制约，很多院校的医学细胞生物学课程的实验课内容仅仅局限在一些验证性和基础性的实验。任课教师需要调整教学内容，增开一些与理论课程密切相关并且与学科前沿紧密联系的综合设计实验。这样可以激发学生的学习兴趣，更好地发挥学生的积极性和主观能动性。其次，培养学生创新能力。任课教师可以在基础性实验之外开设一些探索性及创新性较强的综合实验，例如细胞融合实验、细胞凋亡实验、细胞免疫组织化学实验和免疫荧光实验等。培养并提高学生的实际操作能力以及分析问题和解决问题的能力，使学生初步具备进行设计性实验的能力，提高学生的科研素质和创新能力。然后，设置开创综合实验。任课教师应当结合理论课内容及相关临床应用，修改完善实验课教学大纲，科学设置实验内容，培养学生的实验操作能力，以增强学生的科研兴趣为重点，在实验课教学中适当增加一些开放性强且创新性强的综合实验，让学生运用已掌握的知识与技术进行更深入的研究设想，培养独立科研工作的能力。

2．2实验课教学方法的改革建议

首先，应用启发式教学。与传统的实验课教学相比，在启发式的实验课教学中，任课教师应该在讲解实验目的和原理后，鼓励学生根据所学的知识设计实验过程，然后分析研究最后得到的实验结果以探索实验原理。采用启发式教学可以培养学生的思维能力，引导学生积极思考，启发学生从不同的角度考虑问题，期提高学生的综合科研素质。其次，使用多媒体教学。在医学细胞生物学的实验课教学中，多媒体技术的应用能够极大地方便课堂教学工作。多媒体教学形象生动、易于理解，可以方便地解决一些不容易讲解或者难以开展的实验。另外对于某些受条件所限而不便亲自操作的实验，学生可以观看教学演示片，全面了解这些前沿实验仪器的结构、性能和用途。然后，开展研究型教学。医学细胞生物学的实验课程与科研工作相结合可以提高学生的学习兴趣和科研热情。任课教师在实验课堂上采用开放式的研究型教学可以激发学生的求知欲，让学生学会分析问题和解决问题。开放式研究型的实验课教学，让学生经历严格的科研训练，为以后申报、参与以及实施各种创新性科研项目奠定基础。

2．3实验课考试方式的改革建议

首先，优化考试内容。为全面、科学地考察学生的实际动手能力以及科研创新能力，改革后的医学细胞生物学实验课的考试内容应该以核学生的实验操作水平为主，以考试学生的理论知识水平为辅。这种改革模式，可以培养学生在实验操作过程中分析问题、解决问题的能力，并拓宽学生对实验操作技术在临床应用中的思考。其次，优化考试形式。建立完善的成绩评定体系是保证实验教学质量的关键。实验课程的考试应是一个全方位、多角度、全时段的综合评测，包括平时课堂考试及综合实验考试，平时课堂考试包括出勤情况、课堂回答问题情况和实验操作情况、实验报告完成情况，综合实验考试包括实验理论考试、实验操作考试、开放性及探索性实验考试等。然后，优化评价方案。实验课的考察应该以考察学生运用实验技术的能力为主，包括以下几点：(1)考察学生的平时成绩，包括出勤情况、实验报告完成情况等，占实验课总成绩的20%;(2)考查学生的理论水平，包括实验基本原理、实验技术手段、实验操作方法等，占实验课总成绩的20%;(3)考察学生的实验操作，占实验课总成绩的60%。综上所述，医学细胞生物学的教学是教师与学生共同学习、教学相长的过程。在这个过程中，首先任课教师需要不断提高自身素质，认真做好科研工作并积极学习本课程最先进的理论知识与最前沿的实验技术。其次，任课教师也需要精心把握课程内容，不断总结教学经验，比较各种教学方法的优劣，并将各种教学方法有机结合、交叉运用。同时，任课教师可以根据学生的不同专业方向，改进传统教学模式中教案和课件的内容，在上课时适量引入案例教学，从而调动学生的学习兴趣，提高学生的综合素质。另外，任课教师也需要加强实验课教学的比重，改革实验教学内容，完善实验教学条件，采用多种教学手段，建立完善评价体系，并不断探索研究新实验，使实验课堂更富有学术气氛。以上这些举措是提高医学细胞生物学的教学质量，培养适应现代社会发展的具有较强的综合能力和科研素质，具有独立发现问题、思考问题、分析问题及解决问题能力的创新型医学专业人才。

作者：郑皓 单位：郑州大学基础医学院医学遗传与细胞生物学系

参考文献：

［1］杨宏新，王妍，李晓丹，等．医学院校细胞生物学教学实践与探讨［J］．内蒙古医科大学学报，2015，36(10):933-936．

［2］丁童．医学细胞生物学本科教学特点与教学模式改革［J］．基础医学教育，2013，15(6):559-560．

［3］蔡丽希，陈小萍，许桂芬．医学细胞生物学课堂教学模式创新研究与实践［J］．赣南医学院学报，2014，34(5):696-697．

［4］付燕燕，陈彦，吴健，等．医学细胞生物学实验教学改革的几点思考［J］．基础医学教育，2015，17(2):135-136．

［5］唐历波，李栎，肖憬．临床专业医学细胞生物学实验课程改革的几点建议［J］．治学之法，2014(6):178-179．

［6］胡传银．医学细胞生物学实验教学改革策略的探讨［J］．时代教育，2015(1):213-214．

［7］曲学彬，张强，高锦，等．基于案例的医学院校细胞生物学教学改革初探［J］．基础医学教育，2014，16(8):591-592．

细胞论文 篇七

我经常会让爸爸带我去原山国家级森林公园游玩。有一次，我无意间发现，在秋天，有一种树的叶片是红色的。爸爸告诉我，这是枫树，到了秋天它的叶片就会变红。不过这里的枫树还没有省级自然保护区潭溪山的红呢！我百思不得其解：为什么其它树木都变黄了，而它却变红了呢？带着这个疑问，我去请教家里的“百度爷爷”。

终于，我找到了答案：秋天枫叶变红，有内外两方面的因素。使叶片呈现红色的主要靠两种物质，一种是胡萝卜素，是普遍存在于叶绿体中的橙红色色素，另一种是花青素，存在于液泡内的细胞液中，当细胞液为碱性时，花青素呈蓝紫色，当细胞液呈酸性时，花青素呈红色。入秋以后，枫树叶内的花青素增多，而气温的下降又使叶绿素破坏消失，因此绿叶变成了红叶。变色的外部因素是气候条件：当气温迅速下降到一定程度，而且夜间的温度比白天下降很多时，树叶还没有凋落，而叶绿素已大部被破坏，同时昼夜温差的增大，也有助于花青素的形成，因此叶子很快变红。如果气温下降很慢，而且昼夜温差不大，叶绿素还没有被破坏而树已经枯萎，那就变不成美丽的红叶了，枫树叶里的糖分也起了很大作用呢！

枫树里的糖对枫树叶变红有关系吗？于是，我做了个小实验，我先从山上采下几片绿色的枫叶，把它们分别泡在有糖份和没糖份的杯子里，泡了五天。五天后，有糖水的杯子里的枫叶变红了，只有水的杯子里的枫叶还是绿色。实验证明：枫树里的糖份对枫叶的变红有很大关系！

真是“实践出真知”啊！

细胞生物学论文 篇八

关键词 博士培养 二级学科 高等教育 要领剖析 规划设想

中图分类号：G642 文献标识码：A

0 前言

为培养和激励研究生的创新精神、促进高层次创造性人才的脱颖而出，教育部从1999年起在全国范围内开展评选百篇优秀博士学位论文的工作，至今已历时13届。 其获奖数量已成为衡量高校博士研究生创新能力、学科发展水平及博士生整体质量水平的一个重要指标。①因此，对生物学获奖的学位论文进行研究，总结获奖论文的特点并提出相应的建议，对生物学科的发展乃至研究生的教育培养，都具有极其重要的指导作用和现实意义。

1 全国优秀博士学位论文评选方法

全国优秀博士学位论文评选工作是在教育部和国务院学位委员会领导下，由教育部研究生工作办公室负责组织进行。参评的材料除参评学位论文外，还包括最多5项代表性成果以便专家评议核查，其成果必须与该学位论文内容密切相关，且为攻读博士学位期间及获得学位后一年内获得。

2 生物学1999-2010年全国优秀博士学位论文类别分析

（1）从二级学科情况来看，1999-2010年的12届评选中，生物学共入选72篇，其中生物化学与分子生物学专业入选最多，有18篇（占到总数的26%），其次是神经生物学专业入选13篇，再是细胞生物学专业10篇和遗传学专业8篇，其他的专业都只有零星的几篇获选。

本文主要针对2006年-2010年的获奖论文，进行针对性的比较分析，以刊物影响因子作为相对参考依据（只列入影响因子大于7的第一作者及共1作者）的二级学科分析如下：

以生物化学与分子生物学为例，2006-2010年共获奖6人（见表1），其部分信息如下：

同理分析神经生物学、细胞生物学、遗传学、发育生物学和生物物理学等。

分析数据表明，生物化学与分子生物学、神经生物学和细胞生物学这三个二级学科占据绝对的优势。正是这三大学科所具有的重要性吸引了很多优秀的研究人员，并且催生了多篇优秀博士论文。

（2）从学位授予机构来看，中国科学院上海生命科学研究院以总数21篇遥遥领先于其他单位。北京大学、复旦大学和中国科学院生物物理研究所各有6篇获奖，其余的单位都只有1-2篇入选。

（3）从论文的指导教师来看，存在多篇获奖论文的指导老师是同一名教师的“集聚”现象。其中，来自中国科学院上海生命科学研究院的蒲慕明和段树民的团队共获选了6篇（神经生物学）。中科院上海生命科学研究院的裴钢指导的团队（细胞生物学）、上海交通大学（原中国科学院上海生命科学研究院）的贺林指导的团队（神经生物学）和北京大学的翟中和指导的团队（细胞生物学）都表现得非常突出，分别有3~4篇的获奖论文。

3 生物学1999-2010年全国优秀博士学位论文特点分析

结合自然科学类的全国优秀博士学位论文评估指标体系和上述类别分析的结果，可以总结出下述特点：

（1）在Science 、Nature、Cell等顶级刊物上以第一作者身份发表了相关支撑性论文。

例如2010年获奖的王强、毛颖波、张柯，2009年获奖的丁昇等等。

（2）选题为本学科前沿研究热点和难点问题，具有较大的现实意义和理论意义。

例如管沉冰（2009年）的学位论文“从生长锥到胞体的长距离钙离子信号介导Slit－2引起的神经细胞迁移的翻转”，是目前国际上非常活跃的研究领域，对于研究神经损伤修复的手段有极大的意义。

（3）论文在理论上或方法上有创新，具有开拓性，探索了有价值的新现象、新规律，提出了新命题、新方法，对本学科发展做出了贡献。

例如丁昇（2009年）的“piggyBac转座系统——哺乳动物遗传分析的新工具”，改造了一种来源于粉纹夜蛾的DNA转座子piggyBac(PB)，为在哺乳动物和其它脊椎动物中建立一个作为多功能遗传分析工具的高效转座系统迈出了关键性的第一步。

（4）论文研究成果的应用将取得显著的社会效益和经济效益。

例如毛颖波（2010年）的 “棉酚诱导的棉铃虫P450 GIP的分离鉴定和功能研究”，首次将RNA干扰与植物对昆虫的防御途径联系起来，Nature称之为“RNA干扰杀虫剂”。这一成果引起了社会和学术界的广泛关注，已和孟山都公司签署了合作意向。

（5）论文内容充实饱满、系统性较强、研究全面。

例如龚骏博士（2007年）的“青岛沿海管口目纤毛虫的分类学研究及科属级阶元的系统修订”，系统地对约40个已知属级阶元及同物异名进行了全面的新定义及清理，进而对目内系统做了新的修订。所以虽然发表的21篇支撑论文的影响因子都很小（都只有1左右），然而，博士学位论文因内容充实全面而获奖。

（6）论文语言表达准确、层次清楚，观点鲜明，重点突出，文字精练、图表规范、学风严谨，体现出较强的书写的系统性、逻辑性。

4 培养高质量博士研究生的相关建议

在全国优秀博士学位论文评估指标体系中，论文成果的创新性占了60%的权重。因此应着重创新性的开拓扩展，为自主创新提供适宜的环境。科研实践有助于博士生的创新意识和能力的锻炼和提高，参与国家“973”项目、国家自然科学基金项目等的研究工作都能为博士生创新能力的培养提供得天独厚的条件。

此外，可制订一系列鼓励创新的政策和措施，为博士生开展创新研究提供条件，鼓励创新，营造健康的学术氛围。

建议开展研究生导师经验交流会或优秀博士学位论文培育工作研讨会等，以促进导师的核心作用的发挥。指导学生所选课题应具有原创性，最好与国际前沿的热点或难点领域相关，或在传统学科与相关学科交叉的方向中寻找创新突破点，加大学科交叉力度。

注释

① 熊文，曹一雄，张淑林。以优博论文评选为动力促进博士学位论文质量提升[J].教育与现代化，2007(2):44-48.

细胞生物学论文 篇九

1．1组织块贴壁法分离培养hUC-MSCs脐带取自正常分娩的新生儿(征得其父母同意)。首先用含双抗的磷酸盐缓冲液(PBS)浸洗脐带3次，去除杂物；用无菌的手术剪刀将脐带剪成3～4cm的节段，再沿长度方向剪开，以暴露脐带胶质部分，去除血管；置于含双抗的PBS中清洗3次，去除血污，再剪成约0．5cm3的组织块，以胶质部分贴于基底平铺于24孔板中，每孔2～3块，置于37℃、体积分数5%CO2培养箱孵育1～2h;待组织块自然粘附于皿底部后加入含双抗、FBS的低糖DMEM培养基，继续置于培养箱内培养，每3d更换一次培养基，待观察到有小三角形或梭形细胞从组织中铺展出时，取出组织块。整个分离过程注意无菌操作。待细胞生长至70%～80%汇合时，即可传代。利用倒置相差显微镜观察细胞形态。取第5代细胞，采用细胞免疫荧光技术鉴定hUC-MSCs的表面标记物CD44。

1．2肝细胞标志基因的检测按照总RNA提取试剂盒的操作说明分别提取hUC-MSCs和人肝癌细胞HepG2的总RNA，用RNase-FreeDNaseⅠ去除基因组，最后检测RNA的浓度和纯度，立即进行反转录合成cDNA或保存于－80℃备用。采用Prime-ScriptTMⅡHighFidelityRT-PCR试剂盒反转录2μgRNA得cDNA，取2μL用于PCR。根据GenBank提供的人肝细胞标志基因序列，使用PrimerPremier5．0软件设计引物，引物序列和产物大小见表1。GAPDH为内参对照。PCR反应条件：94℃预变性5min;94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸30s，30个循环；最后72℃延伸5min。PCR产物用20g/L的琼脂糖凝胶电泳，在凝胶分析系统下拍照。

1．3PAS糖原染色按照PAS染色试剂盒的说明书操作，对第5代hUC-MSCs和HepG2进行糖原染色，在倒置相差显微镜下观察并照相。

2结果

2．1hUC-MSCs的分离、培养、传代及鉴定组织块贴壁培养3～4d时，可观察到组织块间隙铺展出小三角形或长梭形的细胞，继续培养至7d左右，可观察到局部细胞呈集落生长，此时，在无菌条件下取出组织块，更换新鲜培养基，继续培养1周左右，细胞可达80%～90%汇合，即可传代。用胰酶/EDTA消化后细胞呈亮而圆的单个分散状，以1∶3的比例进行传代，约4h贴壁，2d后迅速生长。倒置相差显微镜下可观察到细胞较大，轮廓清楚，内部有清晰的应力纤维，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显，呈典型的成纤维细胞样形态(图1A);持续培养大约2周时，细胞基本达到完全汇合，形态发生一定的变化，胞质变得狭窄，内部的应力纤维也不明显，呈平行排列或漩涡生长(图1B)。连续多次传代，细胞保持稳定的、相对均一的成纤维细胞样形态以及较强的增殖能力。经鉴定分离培养的细胞CD44呈阳性表达，且具有良好的均质性。

2．2肝细胞标志基因的表达以HepG2作为阳性对照，用RT-PCR检测hUC-MSCs的肝细胞标志基因的表达情况，结果见图2，hUC-MSCs表达ALB、CK18、G6P、GLUL和MET，不表达TAT。

2．3PAS糖原染色结果对hUC-MSCs和HepG2进行PAS糖原染色，染色结果显示两种细胞的细胞质中均有紫色颗粒物形成，即均呈糖原阳性反应(图3)。

3讨论

MSCs能分泌多种细胞因子和生长因子，具有直接或间接的抗炎及抗纤维化作用，可抑制肝细胞的死亡和纤维化；还可通过其分泌物抑制肝细胞的凋亡、刺激肝细胞再生、为受损肝细胞提供营养支持等。MSCs还具有低免疫原性及免疫抑制力，适用于进行同种异体移植，在移植后可迁移、归巢至受损的组织，发挥治疗作用。因此，MSCs在肝脏疾病的细胞移植治疗中具有广阔的应用前景。研究发现，相较不同来源的MSCs，脐带来源的MSCs不仅具有干细胞的特性，而且来源丰富、取材方便、增殖能力较强、无伦理法律限制，还具有较低的免疫原性和分化程度，从而成为一个非常有吸引力的移植治疗肝病的细胞来源。

作者采用组织块贴壁培养法从脐带基质中分离获得hUC-MSCs，与酶消化法和流式细胞仪或免疫磁珠分选法相比，该分离方法操作简单，消耗低，易于控制。分离培养的hUC-MSCs呈典型的成纤维细胞样形态，具有MSCs的表型特征，均质性良好，且在体外长期培养中能保持稳定状态。进一步的RT-PCR结果显示，培养的hUC-MSCs同时表达成熟肝细胞的标志基因ALB、CK18、G6P、GLUL和MET，而不表达TAT，与Campard等的研究结果一致，提示hUC-MSCs可能具有肝细胞的一些相关功能，如合成白蛋白、合成糖原及解毒功能等；PAS糖原染色结果则证明hUC-MSCs具有糖原合成和储存能力。

但上述结果并不能证明hUC-MSCs为成熟的肝细胞，在其他组织如卵巢、胰脏内也可发现ALB、角蛋白的表达。综上所述，组织块贴壁培养法可有效获得稳定、均质性良好的hUC-MSCs，其本身同时表达多种成熟肝细胞的标志基因并具有一定的肝细胞功能，可能更适宜于作为诱导性肝细胞的起始细胞或直接代替肝细胞用于移植治疗相关的肝脏疾病，从而满足基础研究与再生医学领域尤其临床应用对肝细胞的需求。